کلونینگ و بیان ژن atp سولفوریلاز از یک سوش ایرانی باکتری ژئوباسیلوس گرمادوست

خلاصه آنزیم آدنوزین تری فسفات سولفوریلاز ( atps ) دربسیاری از انواع موجودات وجود دارد. نقش های فیزیولوژیکی مختلفی در موجودات مختلف به آنزیم atps نسبت داده شده که می توان به جذب و احیای سولفات و بازیابی پیروفسفات اشاره کرد. همچنین آنزیم دارای کاربردهای صنعتی و آزمایشگاهی متنوعی است. هدف این مطالعه کلون و بیان ژن تولید کننده پروتئین نوترکیب atps ازیک سوش ژئو باسیلوس ایرانی بود. بعد از جداسازی و تعیین سوش باکتری ژئوباسیلوس کواستافیلوس ، dna ژنومی آن استخراج شد. با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن atps، ژن مورد نظر از رویdna ژنومی تکثیر شد. نتیجه انجام pcr ژن atps به صورت یک باند 1188 جفت بازی بر روی ژل آگاروز مشاهده شد. سپس محصول pcr تخلیص و داخل وکتور کلونینگ کلون شد. باند مربوطه پس از کلونینگ توالی یابی شد و نتیجه بررسی همولوژی آن در بانک اطلاعاتی ncbi تایید کرد که قطعه کلون شده مربوط به ژن atpsاست. ژن مورد نظر در پلاسمید بیانی pet 28a ساب کلون شد. امکان بیان پروتئین نوترکیب atps در باکتری bl21(de3)ازروی orf کلون شده با استفاده از ژل sds-pageبررسی شد. آنالیز پروتئین بیان شده بر روی ژل sds-page یک باند 47.5 کلیو دالتونی را نشان داد. سنجش فعالیت آنزیمی پروتئین مورد نظر به روش لومینسانس atp نشان داد که پروتئین نوترکیب دارای فعالیت می باشد. این اولین مطالعه در رابطه با کلون، بیان و تعیین فعالیت آنزیمی ژن atps از باکتری ژئوباسیلوس کواستافیلوس می باشد.